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鱼肉中5种硝基咪唑类药物的分析方法

应用简介

本实验建立了鱼肉中5种硝基咪唑类药物残留的前处理方法,采用Cleanert® C18小柱结合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)对鱼肉中的5种硝基咪唑类药物进行了测定。样品经甲醇︰丙酮=3︰1(V/V)溶液提取,再经饱和氯化钠和乙酸乙酯液液萃取,Cleanert® C18小柱净化,以5 mmol/L乙酸铵和甲醇为流动相进行梯度洗脱,LC-MS/MS进行检测,外标法定量。结果表明,当加标量为1.0 µg/kg时,回收率在90% ~ 110%之间,能够满足检测要求。

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前言

硝基咪唑类(nitroimidazoles)药物具有抗原虫和抗厌氧菌活性,临床上主要用于治疗畜禽的厌氧菌感染和防治各种原虫病。体内外毒理试验证实,硝基咪唑类药物具有致畸、致突变和致癌作用。因此我国农业部规定禁止甲硝唑、地美硝唑作为饲料添加剂用于食品动物,禁止洛硝达唑用于所有食品动物的任何用途。

本文通过对前处理方法的优化,建立了鱼肉中5种硝基咪唑类药物同时测定的分析方法。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

AB SCEIX API 4000+液相色谱串联质谱仪。

试剂材料

甲醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、乙酸铵均为色谱纯;氯化钠为分析纯;实验用水为超纯水;

5种硝基咪唑类药物混合标准工作溶液:羟甲基咪唑、2-甲硝咪唑、甲硝唑、洛硝达唑、羟基二甲硝咪唑:甲醇溶解;

Cleanert® C18固相萃取小柱:1000 mg/6 mL。

样品制备

样品提取

称取均质好的鱼肉样品20 g置于250 mL具塞锥形瓶中,加入10 g硅藻土与样品充分混匀,再依次加入5 mL饱和氯化钠溶液水溶液和70 mL甲醇︰丙酮=3︰1(V/V),高速均质3 min。将提取液转移至离心管中,于10000 r/min条件下离心5 min,将上清液转移至250 mL浓缩瓶中,剩余残渣用甲醇︰丙酮=3︰1(V/V)重复提取两次,合并提取液。将提取液用40℃旋蒸至只剩余水相,转移至分液漏斗中,加入50 mL饱和氯化钠和25 mL乙酸乙酯,振摇3 min,静置分层,收集乙酸乙酯相,水相再用20 mL乙酸乙酯重复提取2次,合并乙酸乙酯相。再经约3 g的无水硫酸钠脱水,收集于浓缩瓶中,40℃旋蒸至近干,加入5 mL甲醇溶解残渣,并用0.45 µm Nylon针式过滤器过滤,待净化。

样品净化

将Cleanert® C18小柱用5 mL甲醇活化平衡,将上述待净化液全部上样于小柱上,收集流出液,再用10 mL甲醇洗脱小柱,收集流出液,合并两次流出液,于45℃下旋转蒸发至干,用流动相定容至1 mL,待检测。

基质混合标准工作溶液

取高浓度硝基咪唑混合标准溶液,用空白样品基质溶液稀释成0.02 µg/mL的基质混合标准工作溶液。

实验条件

色谱条件

色谱柱:Venusil MP C18,3 µm,100 Å,3.0 × 50 mm

流动相:A相-5 mmol乙酸铵溶液,B相-甲醇

柱  温:30℃

进样量:5 µL

梯度洗脱条件(见表1)

表1. 液相色谱梯度洗脱条件

时间(min)

流速(mL/min)

A%

B%

0.0

0.3

95

5

1.0

0.3

95

5

3.5

0.3

10

90

6.0

0.3

10

90

6.1

0.3

95

5

10.0

0.3

95

5

质谱条件

离子源:ESI+;电喷雾电压:5500 V;雾化气压力:50 psi;气帘气压力:25 psi;辅助气压力:50 psi;离子源温度:500℃;采集方式:多反应监测(MRM)。

表2. 5种硝基咪唑类药物质谱参数

物质名称

Q1

Q3

DP/V

CE/V

羟甲基咪唑

187.7

126.2

64.0

25.0

123.3

64.0

18.0

2-甲硝咪唑

128.2

82.2

88.8

24.7

111.2

88.8

23.6

甲硝唑

172.0

128.2

63.0

21.2

82.2

63.0

36.7

洛硝达唑

201.4

140.2

80.0

17.0

145.0

80.0

35.0

羟基二甲硝咪唑

157.8

140.2

50.0

17.0

55.1

50.0

27.0

注:“下划线”为定量离子。

结果与讨论

由表3可知,采用SPE结合LC-MS/MS的方法检测鱼肉中5种硝基咪唑类药物,加标回收率在90% ~ 110%之间,且变异系数小于10%,能够满足检测要求。从图1来看,用Venusil MP C18色谱柱分离5种硝基咪唑类药物,分离效果良好。

表4. 鱼肉中5种硝基咪唑类药物加标回收实验结果(添加水平1.0 µg/kg)

物质名称

保留时间/min

平均回收率/%

RSD/%

羟甲基咪唑

3.19

108.0

4.0

2-甲硝咪唑

5.14

102.3

6.6

甲硝唑

5.14

104.4

5.0

洛硝达唑

4.99

100.3

5.5

羟基二甲硝咪唑

4.48

92.0

2.7

图1. 0.1 µg/mL 5种硝基咪唑类药物混合标准溶液色谱图

结论

本实验建立了鱼肉中5种硝基咪唑类药物的前处理方法,并结合LC-MS/MS对样品进行了检测。结果表明,对于加标量为1.0 µg/kg的鱼肉样品,加标回收率在90% ~ 110%之间,满足检测要求,且变异系数小于10%,稳定性良好。说明该方法适用于鱼肉中5种硝基咪唑类药物的同时检测。

附:相关产品

产品名称

规格描述

包装数量

订货号

Cleanert® S C18

1000 mg/6 mL

30支/包

S180006

卓睿全自动固相萃取仪

4通道,24位

1台

SPE-40

Venusil MP C18

3   µm,100 Å,3.0   × 50 mm

1支

VA930503-0

1.5 mL样品瓶

短螺纹透明带书写处

32   × 11.6 mm

100/pk

1109-0519

氮吹仪

15位

1台

NV15-G

1.5   mL样品瓶盖

9   mm中心孔蓝盖,红色橡胶/米色PTFE隔垫

45°Shore   A; 1.0 mm

100/pk

0915-1819

尼龙针式过滤器

单膜,13   mm,0.22 µm

200个/包

AS021320

一次性注射器

2   mL无针头

100支/包

LZSQ-2ML

应用编号:AF10147



  • Cleanert S C18(封端)

    Cleanert S C18 是以高纯球型硅胶为基质的反相C18 萃取柱。与普通C18 材料比较,球型材料均匀度更高,流速更稳定;高纯的硅胶表面,避免了对碱性与极性物质的过度吸附,更适合用于萃取低浓度分析物;

  • Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪

    Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪是针对食品、农产品、医药等行业污染物分析而设计的样品前处理设备,可以实现从活化、上样、淋洗至洗脱整个固相萃取过程的全自动化。4 萃取通道,连续处理24 个样品,通过独特的设计,实现小体积上样的同时,兼顾大体积样品中有机物、重金属、农药残留等痕量污染物的富集。

  • Venusil MP C18

    Venusil MP C18 是一款通用型制备柱,适用于分离 极性和非极性化合物。

  • ND9(广口)

    广口短螺纹样品瓶 适配:Agilent Thermo Scientific Varian Waters etc.

  • NV24A-II 全自动浓缩氮吹仪

    NV24A-II 全自动浓缩氮吹仪具有处理量大、环保、自动化程度高等优点,应用于各种类型的自动化工作站,遍及环保、供水、药检、食品检验、法医鉴定等领域,适用于较高端样品前处理的实验室要求。

  • 尼龙(Nylon通用)

    广泛的化学相容性(避强酸),良好的柔韧性 ,与大多数试剂相容,低蛋白吸附。 应用于电子、微电子、半导体工业水过滤;药液、饮料、高纯化学品的过滤

  • HPLC 过滤专用一次性注射器

    专业医用注射器厂家生产;节约成本;无需按医疗废弃物处理。

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技术方案 2016年07月12日
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